Autori: (1)Perri A, (1)Vizza D, (2)Lappano R, (1)Toteda G, (1)Lupinacci S, (1)De Bartolo A,(2)Maggiolini M, (1)La Russa A, (1)Lofaro D, (1)Gigliotti P, (1)Leone F, (1)Bonofiglio R.
Affiliazioni: (1)Centro di Ricerca “Rene e Trapianto” – UOC Nefrologia, Dialisi e Trapianto, Ospedale Annunziata, Cosenza; (2)Dipartimento di Farmacia e Scienze della Salute e della Nutrizione, Università della Calabria, Rende (CS)
RAZIONALE. La regione tubulo-interstiziale, particolarmente vulnerabile al danno ipossico, in presenza di ipossia, esercita un ruolo cruciale nel danno profibrotico renale, attraverso meccanismi molecolari, alcuni HIF1-α-mediati, ancora non completamente chiariti. Nostri recenti studi hanno dimostrato che, nelle cellule tubulari l’esposizione al Nerve Growth Factor (NGF) promuove Epithelial to Mesenchimal Transition (EMT) via p75NTR. NGF è un gene target del recettore estrogenico GPER, la cui attivazione trascrizionale, ipossia-indotta e HIF1-α-mediata, promuove danno ipossico. Scopo del lavoro è stato, dunque, quello di investigare il ruolo di p75NTR e GPER nell’EMT ipossia-indotta nelle cellule tubulari.
METODOLOGIA. Sono state trattate cellule del tubulo prossimale renale immortalizzate (HK-2) con cloruro di cobalto e analizzate espressione genica e proteica tramite qPRC e western blot (WB) e attività di promoter tramite saggi di trasfezione transiente.
RISULTATI. I dati di WB dimostrano che nelle HK-2 l’ipossico-mimetico CoCl2 (100µM) aumenta l’espressione proteica di GPER, HIF-1α, NGF e p75NTR. Studi di trasfezione transiente con costrutti contenenti i promoter di p75NTR e GPER, mostrano che il CoCl2 attiva trascrizionalmente GPER e p75NTR e up-regola l’espressione genica e proteica dei marcatori di fibrosi Vimentina, N-Caderina, αSMA, reversata in cellule trasfettate con p75NTR siRNAi o pretrattate con Ab-anti-NGF. Nelle HK-2 COCL2-esposte il GPER siRNA reversa l’upregolazione di NGF, p75NTR, dei markers fibrotici e riduce il contenuto nucleare di EGR-1, gene target di GPER, importate nella fibrogenesi renale e nella transattivazione di p75NTR.
CONCLUSIONI. I risultati preliminari mostrano un nuovo meccanismo di danno ipossico tubulare, mediato dal cross-talk dei recettori p75NTRe GPER.