Autori: Lupinacci S, 1Vizza D, 1Perri A, 1Toteda G, 1Passarelli A, 1De Bartolo A, 2Stallone G, 3Pontrelli P, 1La Russa A, 1Lofaro D, 1Gigliotti P, 1Leone F, 1Bonofiglio R.
Affiliazioni: 1Centro di Ricerca “Rene e Trapianto” – UOC Nefrologia, Dialisi e Trapianto, Ospedale Annunziata, Cosenza. 2UO Nefrologia, Dialisi e Trapianto, Dip. Scienze Mediche e Chirurgiche, Università di Foggia 3Dip. Dell’Emergenza e del Trapianto d’organo, Università degli Studi di Bari Aldo Moro
RAZIONALE. I pazienti portatori di trapianto renale hanno un rischio di sviluppare Sarcoma di Kaposi (KS) circa 100 volte superiore alla popolazione generale e lo switch da inibitori delle calcineurine a inibitori di mTOR promuove la regressione della lesione, attraverso meccanismi molecolari, non ancora completamente chiariti. Nostri lavori precedenti hanno dimostrato che nelle cellule tubulari esposte a danno proteinurico, l’attivazione trascrizionale Rapamicina-indotta di p75NTR attiva il flusso autofagico. Scopo dello studio è stato quello di investigare il ruolo dell’autofagia nell’azione antitumorale indotta dalla Rapamicina (Rapa) in cellule di KS che, costitutivamente, esprimono p75NTR.
CASISTICA E METODI. Sono state trattate cellule immortalizzate di KS (KSC) con Rapa e analizzate vitalità e migrazione cellulare, apoptosi, espressione genica e proteica, attività di promoter tramite MTT, migration-tests, DNA laddering, qPRC, western blot (WB), trasfezione transiente, rispettivamente.
RISULTATI. I saggi di MTT mostrano che nelle KSC la Rapa (40ng/ml) riduce la vitalità non promuovendo apoptosi, poiché non causa frammentazione del DNA né induce markers pro-apoptotici (caspasi 3, PARP, p53), ma attraverso l’autofagia poiché upregola i marcatori di flusso autofagico (BCN1, LC3, p62). Saggi di migration e di WB mostrano che la Rapa, via PI3K/AKT/mTor, riduce la motilità cellulare e l’espressione di MMP9, MMP2 e VEGF. Nelle KSC trasfettate con il promoter di p75NTR, la transattivazione Rapa-indotta del p75NTR attiva l’autofagia e riduce l’espressione genica e proteica del VEGF e dei marcatori di fibrosi (WB), effetti reversati in presenza del p75NTR siRNA.
CONCLUSIONI. I dati in vitro dimostrano che nel KS la Rapa esercita effetti antitumorali anche attraverso l’attivazione dell’autofagia via p75NTR.