Autori: Grazia Serino(1), Sharon N. Cox(2), Mario Giordano(3), Gabriella Aceto(3), Francesco P. Schena(2,4)
Affiliazioni: (1)IRCCS “S. De Bellis”, Castellana Grotte, Bari (2)Fondazione Schena, Centro Europeo della Ricerca per le Malattie Renali, Bari (3)Unità di Nefrologia Pediatrica – Ospedale Pediatrico Giovanni XXIII, Bari (4)Dipartimento dell’Emergenza e dei Trapianti d’Organo- Università degli Studi di Bari
Razionale
La IgA Nefropatia (IgAN) è la principale forma di glomerulonefrite primitiva in bambini e adolescenti sottoposti a biopsia renale a causa di episodi di macroematuria associata a infezioni delle alte vie respiratorie o microematuria associata a proteinuria. Il difetto risiede soprattutto nel sistema immunitario e nei linfomonociti periferici piuttosto che su anomalie renali. Per questo motivo, scopo di questo lavoro è stato studiare l’espressione genica totale di queste cellule.
Casistica e Metodi
Abbiamo studiato linfomonociti periferici del sangue isolati da 20 bambini affetti da IgAN e 20 bambini con enuresi notturna (controlli). La differenza di espressione genica totale è stata studiata mediante la tecnologia microarray Illumina. L’analisi bioinformatica è stata effettuata con il software GenomeStudio and Genespring. La connettività tra geni è stata valutata con Ingenuity Pathway Analysis. In seguito, i geni e le pathway trovate significativamente aberranti nei bambini con IgAN rispetto ai controlli sono stati validate su una casistica indipendente di pazienti e controlli con Real-Time PCR e Western blot.
Risultati
L’analisi bioinformatica ha evidenziato 31 geni differenzialmente espressi tra i bambini affetti da IgAN e i controlli, di questi 12 risultavano upregolati e 19 downregolati nei pazienti con IgAN. L’analisi delle pathway ha dimostrato che la maggior parte di questi geni appartenevano alle seguenti pathway e network funzionali: CXCR4 signalling, risposta infiammatoria e migrazione cellulare. La validazione con Real-Time PCR di geni rappresentativi delle pathway molecolari come CCR2, CXCR4, TNFAIP3, CXCL10 E GBP1, effettuata su una casistica indipendente di bambini affetti da IgAN e controlli ha confermato i dati ottenuti dal microarray. L’analisi mediante Western blot ha riconfermato la dowregolazione di CXCR4 nei bambini con IgAN rispetto ai controlli.
Conclusioni
I nostri risultati suggeriscono che i geni differentemente modulati nei bambini con IgAN determinano una alterata risposta infiammatoria su base immunitaria dove diversi geni sono coinvolti nella aberrante migrazione dei linfomonociti periferici.
Bibliografia: